| نام مرکز
|
:
|
دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
|
| نوع مدرک
|
:
|
پایان نامه فارسی
|
| زبان مدرک
|
:
|
فارسی
|
| شماره رکورد
|
:
|
101316
|
| شماره مدرک
|
:
|
ت۱۳۶۷۶
|
| شماره راهنما
|
:
|
QU،۱۴۱،ع۶۴۳ب،۱۳۹۱
|
| سرشناسه
|
:
|
عصارزاده، سمانه
|
| عنوان
|
:
|
بهینه سازی تولید و خالص سازی آنزیم Taq پلیمر از موتاسیون یافته N666E [پایان‌نامه]
|
| نویسنده
|
:
|
/سمانه عصارزاده
|
| استاد راهنما
|
:
|
؛ حمید میرمحمد صادقی، محمد ربانی
|
| محل تحصیل
|
:
|
دانشکده داروسازی و علوم دارویی
|
| سال تحصیل
|
:
|
، ۱۳۹۱
|
| مقطع تحصیلی
|
:
|
رشته داروسازی، دکترای داروسازی
|
| تاریخ دفاع
|
:
|
1391/04/22
|
| صفحه شمار
|
:
|
ز، ۷۳ ص.: مصور، جدول، نقشه، نمونه
|
| يادداشت
|
:
|
این یک پایان نامه تحقیقاتی به شماره ۳۸۹۳۰۴ است
|
| يادداشت
|
:
|
چاپی
|
| چکيده
|
:
|
هدف از این پروژه جدا سازی و خالص سازی آنزیم Taq پلیمراز نو ترکیب از گونه باکتری اشرشیاکلی BL12 می باشد. آنزیم Taq پلیمراز آنزیمی با وزن مولکولی ۹۴kDAمی باشد که به صورت گسترده درPCR کار برد دارد. در واکنش PCR فعالیت و دقت آنزیم Taq پلیمراز تاثیر زیادی بر روی نتایج دارد. یکی از قسمت های مهم دخیل در فعالیت آنزیم Taq پلیمراز منطقه O-helix آنزیم می باشد. در طی تحقیقات قبلی یک وکتور بیانی شامل موتاسیون Asn-666-Glu بر روی ژن آنزیم taq پلیمراز طراحی شده است. به منظور بررسی تاثیر این موتاسیون بر روی فعالیت آنزیم در ابتدا باید به خالص سازی آنزیم Taq پلیمراز پرداخت. در این مطالعه پس از ترانسفورم کردن سلولهای پذیرا با پلاسمید حاوی ژن Taq پلیمراز موتانت شده در ناحیه N666E و القای بیان آنزیم با ایزو پروپیل بتا تیوگالاکتوزید از روش های خالص سازی Desai پروتکل Desai بهینه سازی شده، رزین- نیکل، تری کلرواستیک اسید و رفولدینگ به منظور تلخیص آنزیم Taq پلیمراز استفاده گردید و در نهایت به مقایسه این روشها با یکدیگر پرداخته شد. در مقایسه نتایج با یکدیگر، استفاده از پروتکل Desai علاوه بر اینکه باندی شارپ در ناحیه مورد نظر ایجاد نمود در سایر نواحی نیز باندهایی دیده شد، اما پس از بهینه سازی پروتکل Desai تنها باند مورد نظر قابل مشاهده است. با استفاده از تری کلرواستیک اسید و رزین -نیکل باند های دیده شده در ناحیه ۹۴ kDaضعیف بوده و گاها باند های دیگری در سایر نواحی دیده می شود. با رفولدینگ آنزیم، باند ایجاد شده در ناحیه ۶۶ kDaمشاهده شد. در بین تکنیک های مختلفی که در این مطالعه استفاده شد، روش خالص سازی Desai که با استفاده از RNase و DNase بهینه سازی شده باعث ایجاد باندی واضح و مناسب در ناحیه ۹۴ kDaگردید. استفاده از تری کلرو استیک اسید به منظور رسوب پروتئین هایی که با حرارت از بین نرفته اند و استفاده از رزین- نیکل باعث حذف تقریبی باندهای ناخواسته شد، هر چند مقدار آنزیم مورد نظر را نیز در ناحیه ۹۴ kDaکاهش داد. در مورد باند ۶۶ kDaایجاد شده در پروسه رفولدینگ آنزیم این احتمال وجود دارد که در حین جداسازی اینکلوژن بادی ها از سلول باقی ماندن آنزیم پروتئاز باعث شکست آنزیم در این ناحیه شده باشد
|
| توصیفگر
|
:
|
۱. دی ان ا نوکلئوتیدیل اگزوترانسفراز.- کلید واژه‌ها: دی ان ا نوکلئوتیدیل اگزوترانسفراز
|
|
|
:
|
واکنش زنجیره‌ای پلیمراز
|
|
|
:
|
آنزیم‌های محدودساز دی ان‌ا
|
|
|
:
|
محیط کشت
|
|
|
:
|
DNA Nucleotidyltransferases
|
|
|
:
|
Polymerase Chain Reaction
|
|
|
:
|
DNA Restriction Enzymes
|
|
|
:
|
Culture Media
|
|
|
:
|
Taq Polymerase
|
| شناسه افزوده
|
:
|
میرمحمد صادقی، حمید، استاد راهنما
|
|
|
:
|
ربانی، محمد، استاد راهنما
|
| شناسه افزوده
|
:
|
دانشکده داروسازی و علوم دارویی
|