کلون کردن ژن رتپلاز در پلاسمید حاوی پروموتر ‭tac‬

منو

" کلون کردن ژن رتپلاز در پلاسمید حاوی پروموتر ‭tac‬ "
/صفیه آقاعبداللهیان ؛ حمید میر محمد صادقی، محمد ربانی، کامران قائدی

نام مرکز	:	دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	101543
شماره مدرک	:	‭ت۱۴۰۱۳‬
شماره راهنما	:	‭QU،۱۴۲،آ۶۵۳ک،۱۳۹۱‬
سرشناسه	:	آقاعبداللهیان، صفیه
عنوان	:	کلون کردن ژن رتپلاز در پلاسمید حاوی پروموتر ‭tac‬ [پایان‌نامه]
نویسنده	:	/صفیه آقاعبداللهیان
استاد راهنما	:	؛ حمید میر محمد صادقی، محمد ربانی، کامران قائدی
محل تحصیل	:	دانشکده داروسازی و علوم دارویی
سال تحصیل	:	، ‭۱۳۹۱‬
مقطع تحصیلی	:	رشته داروسازی، دکترای داروسازی
صفحه شمار	:	‮س، ‭۷۳‬ ص.‬: مصور ( رنگی) ، جدول
يادداشت	:	این یک پایان نامه تحقیقاتی با شماره‭ ۳۸۹۳۸۳ ‬است
يادداشت	:	چاپی
چکيده	:	رتپلاز فرم نوترکیب فعال کننده پلاسمینوژن بافتی ‭( t- PA )‬ است که برای درمان اختلالات انسدادی به کار می‌رود. مزیت های بالینی ‭t- PA‬ از جمله فقدان برخی از عوارض جانبی باعث جذب تلاش های محققان در جهت تولید نوع ترکیب آن شده است با توجه به مشخصه‌های هر کدام از سیستم های بیانی و جهت تولید بهینه این دارو، این مطالعه با هدف کلون کردن آن با استفاده از پروموتر ‭tac‬ در سلول های ‭E. Coli‬ طراحی شده است. ژن رتپلاز با استفاده از پرایمرهای مناسب و طی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز ‭( PCR )‬ تکثیر شد و محصول به دست آمده در پلاسمید ‭pTZ57R‬ کلون گردید. پلاسمید نوترکیب بدست آمده توسط آنزیم های محدود کننده ‭Bam HI‬ و ‭Xho‬ برش داده شد و ‭insert‬ حاصله به درون وکتور بیانی ‭pGEX- 5x-1‬ وارد شد. وجود ‭insert‬ در وکتور بیانی با کمک هضم آنزیمی و تعیین توالی نوکلوئیدی تایید شد. وکتور بیانی نوترکیب سلول های ‭E. Coli top 10‬ ترانسفورم و بیان پروتئین با افزودن غلظت های‭ ۰/۵ ،۰/۲ ‬و‭mM ۱ ‬ از ‭isopropyl beta- D thiogalactopyranoside ( IPTG )‬ القا شد و سپس تحت آنالیز با ‭SDS- PAGE‬ قرار گرفت. الکتروفورز محصول ‭PCR‬ و همچنین هضم آنزیمی پلاسمید ‭pTZ57R‬ نوترکیب باند ‭ ۱۰۶۸ bp‬که مطابق با سایز رتپلاز بود را نشان داد. همچنین الکتروفورز نمونه حاصل از هضم آنزیمی پلاسمید بیانی نوترکیب ‭pGEX- 5x- 1-/Reteplase‬ نیز باندی با همین سایز مشاهد. آنالیز ‭SDS- PAGE‬ نشان دهنده بیان یک باند پروتئین ‭ ۶۵ KDa‬بود که در اثر القا بیان با ‭IPTG‬ تولید شده بود. وزن مولکولی پروتئین بیان شده با نتایج مطالعات قبلی انجام شده در سلول های ‭E. Coli‬ مطابقت داشت. لیکن تفاوت ماشهده شده با نتایج بیان در سیستم های بیانی دیگر به دلیل تغییرات پس از ترجمه رخ داده در این سیستم ها و نیز همجوش بودن محصول پروتئینی ما با پروتئین ‭gst‬ بود. نتایج نشان دهنده کلون و بیان موفقیت آمیز با استفاده از پروموتر ‭tac‬ در سلول های ‭E. coli‬ بود و وکتور بیانی و پروتئین بیان شده مورد نظر جهت مطالعات آتی بهینه‌سازی تولید مورد استفاده قرار خواهد گرفت
توصیفگر	:	۱. فعال کننده‌های پلاسمینوژن.- کلیدواژه‌ها: فعال کننده‌های پلاسمینوژن
	:	داروهای حلال لخته
	:	درمان لیز کننده لخته
	:	آنزیم ها
	:	بیان ژنی
	:	پروتئین ها
	:	Plasminogen Activators
	:	Thrombolytic Therapy
	:	Fibrinolytic Agents
	:	Enzymes
	:	Gene Expression
	:	Proteins
شناسه افزوده	:	میر محمد صادقی، حمید، استاد راهنما
	:	ربانی، محمد، استاد راهنما
	:	قائدی، کامران، استاد راهنما
شناسه افزوده	:	دانشکده داروسازی و علوم دارویی