بیان ژن کد کننده ‭DNA‬ پلیمراز ‭Pfu‬ در اشرشیاکلی

منو

" بیان ژن کد کننده ‭DNA‬ پلیمراز ‭Pfu‬ در اشرشیاکلی "
/زهرا خلیلی بروجنی ؛ محمد رضا مفید، داریوش عابدی

نام مرکز	:	دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	101875
شماره مدرک	:	‭ت۱۴۴۴۷‬
شماره راهنما	:	‭QU،۱۴۱،خ۷۲۱ب،۱۳۹۲‬
سرشناسه	:	خلیلی بروجنی، زهرا
عنوان	:	بیان ژن کد کننده ‭DNA‬ پلیمراز ‭Pfu‬ در اشرشیاکلی [پایان‌نامه]
نویسنده	:	/زهرا خلیلی بروجنی
استاد راهنما	:	؛ محمد رضا مفید، داریوش عابدی
محل تحصیل	:	دانشکده داروسازی و علوم دارویی
سال تحصیل	:	، ‭۱۳۹۲‬
مقطع تحصیلی	:	رشته داروسازی، دکترای داروسازی
صفحه شمار	:	‮س، ‭۷۸‬ ص.‬: مصور( بخشی رنگی) ، جدول
يادداشت	:	این یک پایان نامه تحقیقاتی با شماره‭ ۳۸۹۳۶۹ ‬است
يادداشت	:	چاپی
چکيده	:	‭DNA‬ پلیمرازها به عنوان ابزارهای ضروری در زیست شناسی مولکولی سنتز مولکول ‭DNA‬ را از دئوکسی‌نوکئوتیدها بر عهده دارند‭DNA .‬ پلیمراز ‭Pfu‬ از پیروکوکوس فوریوسوس، یک آرکئوباکتری بی‌هوازی گرمادوست که در رسوبات دریایی با دمای بین‭ ۹۰ ‬تا‭ ۱۰۰ ‬درجه سلسیوس زندگی می‌کند، جدا گردیده است.این آنزیم با داشتن خصوصیت اگزونوکلئازی‭ ۳ ‬به‭ ۵ ‬قادر است خطاهای ناشی از همانندسازی ‭DNA‬ را اصلاح کند. به دنبال طرح های قبلی انجام شده در دانشکده داروسازی در این طرح بیان ژن ‭DNA‬ پلیمراز ‭Pfu‬ انجام گرفت. قطعه کد کننده ژن ‭DNA‬ پلیمراز ‭Pfu‬ در ناقل بیانی ‭pET - 15b‬ کلون گردید. سپس با تغییر شرایط بیان مانند غلظت ‭IPTG‬، زمان و دمای القا، بیان این آنزیم بهینه شد. در نهایت در شرایط بهینه، پروتئین در مقیاس بالا تهیه و به روشی ساده تخلیص گردید. سپس آنزیم تخلیص شده جهت بررسی فعالیت در واکنش ‭PCR‬ به کارگرفته شد. کلونی هایی بعد از ترانسفورماسیون ایجاد شد که اکثر آنها حاوی پلاسمید بودند. بیان آنزیم ‭Pfu‬ باندی را در حدود ‭ ۹۰ KD‬در ژل الکتروفورز ‭SDS- PAGE‬ نتیجه داد. بیشترین میزان تولید پروتئین با غلظت‭ ۰/۷۵ ‬میلی مولار ماده القا کننده ‭IPTG‬ ، در دمای‭ ۳۷ ‬درجه و‭ ۳ ‬ساعت پس از القا مشاهده شد. آنزیم تخلیص شده در واکنش ‭PCR‬ فعالیتی مشابه با نمونه تجاری داشت. شرایط بهینه سازی بدست آمده در این طرح با شرایط بهینه سازی بیان ژن ‭DNA‬ پلیمراز ‭Pfu‬ در مطالعات دیگر متفاوت بود. با استفاده از این اطلاعات می‌توان شرایط را برای تولید انبوه این آنزیم فراهم نمود
توصیفگر	:	۱. واکنش زنجیره‌ای پلیمراز.- کلیدواژه‌ها: واکنش زنجیره‌ای پلیمراز
	:	آنزیم‌های محدودساز دی ان ا
	:	بیان ژنی
	:	اشریشیاکولی
	:	Polymerase Chain Reaction
	:	DNA Restriction Enzymes
	:	Gene Expreesion
	:	Escherichia Coli
	:	Pyrococcus furiosus
	:	DNA-Directed DNA Polymerase
شناسه افزوده	:	مفید، محمدرضا، استاد راهنما
	:	عابدی، داریوش، استاد راهنما
شناسه افزوده	:	دانشکده داروسازی و علوم دارویی