This page uses JavaScript and requires a JavaScript enabled browser.Your browser is not JavaScript enabled.
This page uses JavaScript and requires a JavaScript enabled browser.Your browser is not JavaScript enabled.
خط مشی دسترسی
درباره ما
ثبت نام
راهنما
فارسی
ورود
صفحه اصلی
X
جستجو
X
جستجوی مدارک
X
تمام متن
X
منابع دیجیتالی
جستجوی مدارک
تمام متن
منابع دیجیتالی
گالری
کتابخانه شخصی
پرسش و پاسخ
تازه ها
خطا
رکورد قبلی
رکورد بعدی
نام مرکز
:
دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک
:
پایان نامه فارسی
زبان مدرک
:
فارسی
شماره رکورد
:
102029
شماره مدرک
:
ت۱۴۶۳۹
شماره راهنما
:
WC،۵۰۳/۲،ک۴۶۶ب،۱۳۹۲
سرشناسه
:
کرمزاده، آرزو
عنوان
:
بررسی توانایی وکتورهای انتی ویروسی ناقص از نظر آنزیم های رونوشت بردای معکوس و اینتگراز در بیان ترانس ژن در رده سلولی۲۹۳T [پایاننامه]
نویسنده
:
/آرزو کرم زاده
استاد راهنما
:
؛ حسین خان احمد
استاد مشاور
:
؛ رسول صالحی
محل تحصیل
:
دانشکده پزشکی
سال تحصیل
:
، ۱۳۹۲
مقطع تحصیلی
:
رشته ژنتیک انسانی، کارشناسی ارشد
صفحه شمار
:
ح، ۹۸ ص.: مصور، جدول، نمودار
يادداشت
:
این یک پایان نامه تحقیقاتی با شماره ۳۹۱۳۳۵ است
يادداشت
:
چاپی
چکيده
:
یکی از راهکارهای ژن درمانی عفونت HIV-1 کشتن سلول های آلوده به ویروس با استفاده از ژن های خودکشنده است. اما چالش مهم در این روش منحصر کردن بیان ژن خودکشنده در این سلول هاست. راه حلی که برای این مشکل پیشنهاد می شود آن است که با حذف توالی ژنی دومن RNase H از آنزیم رونوشتت بردار معکوس و آنزیم اینتگراز با یا بدون جهش دومن P51 (تبدیل تریژتوفان ۲۲۹ به لیزین) از ناقل Plp1 یکی از سه ناقل کمکی در ساخت وکتورهای لنتی ویروسی نسل سوم لنتی وکتوری ناقصی از نظر آزیم های اینتگراز و رونوشت بردار معکوس ساخته شود. انتظار می رود این وکتورها از این دو آنزیم که تنها در سلول های آلوده به ویروس HIV-1 وجود دارد برای تبدیل RNA ژنومی خود به DNA درج آن و در نتیجه بیان ژن خودکشنده و کشتن اختصاصی این سلول ها استفاده کنند. در مطالعه حاضر توانایی تولید جنین لنتی وکتور ناقصی از نظر آنزیم های اینتگراز و رونوشت برادار معکوس بررسی شد. قطعه P51 جهش یافته و قطعه P51 به ترتیب با روش Overlap extgension PCR و CRP تکثیر شدند ساخت دو نوع پلاسمید pLP1 جهش یافته با کلون کردن هر یک از این قطعات در پلاسمید pLP1 فاقد ژن اینتگراز و RNASE H انجام شد. تولید وکتور لنتی ویروسی با ترانسفکشن همزمان ناقل plenti-DEST به همراه ناقل های کمکی pLP2, pLP/VSV-G, pLP1 به روش کلسیم- فسفات به درون رده سلولی T293 صورت گرفت پس از استخراج RNA ویروس و سنتز cDNA با تکنیک Absolute Real-time PCR تیتر وکتورهای لنتی ویروسی ناقص و طبیعی مورد بررسی قرار گرفت همچنین بیان ژن eGFP بعد از ترانسداکشن حجم های متفاوت ۴ ،۱۶ ،۶۴ ،۱۲۸)و ۱ میکرولیتر) از سوپ تغلیظ شده ویروس ها در سلول های T293 با میکروسکوپ فلورسانس بررسی شد. تیتر لنتی وکتورهای طبیعی محاسبه شد و هیچ یک از لنتی وکتورهای ناقص طراحی شده در این مطالعه تکثیری نداشنند. همچنین برخلاف لنتی وکتورهای طبیعی که بین افزایش غلظت ویروس و درصد سلول های T293 سبز شده ارتباط مستقیم وجود داشت. وکتورهای لنتی ویروسی ناقص هیچ بیانی از ژن eGFP نشان ندادند که همراه با نتایج حاصل از Real-time بیانگر عدم تولید این وکتورها در این مطالعه بود. دلایل احتمالی عدم موفقیت در تولید وکتورهای لنتی ویروسی ناقص می تواند این باشد که مطالعاتی با حذف های مشابه این تحقیق که موفق به تولید لنتی ویروس های ناقص شده بودند از وکتورpNL4-3 که حاوی توالی کامل ژنوم ویروس HIV-1 و ژن های ویرولانس بود، استفاده کرده نمودند، بر خلاف وکتورهای لنتی ویروسی نسل سه که برای ساختشان نیازمند سه پلاسمید مجزا هستند. این مطالعات همچنین با کاهش تیتر ۳۰-۷۰ درصد لنتی ویروسهای حاصل از حذف همزمان دومن های اینتگراز و RNase H مواجه شدند با توجه به این که لنتی وکتورهای نسل سه از تیتر پایینی برخوردارند حال با افزودن دو نقص آنزیمی مذکورچه بسا تیتر این وکتورها نیز چنان کاهشی پیدا کرده است. که غیر قابل تیتراسیون هستند. از طرفی شاید همچونIntegrase-deficient leniviral vectors (IDLVs) تنها گروه خاصی که از جهش ها در تولید لنتی ویرال وکتور ناقص از نظر آنزیم های رونوشت بردار معکوس و اینتگراز کاربردی بوده و حذف های ژنی انجام شده در این مطالعه در دسته جهش های ممانعت کننده از ساخت وکتور محسوب می شوند. در آخر پیش بینی می شود که شاید با افزایش تیتر تولیدی وکتورهای لنتی ویروسی طبیعی تا ۱۰ به توانTU/ml ۶ و یا بیشتر امکان تولید چنین وکتورهای ناقصی وجود داشته باشد.
توصیفگر
:
۱- ژن درمانی.- کلیدواژهها: ژن درمانی
:
اچ آی وی - ۱
:
عفونت های اچ آی وی - ۱
:
Gene Therapy
:
HIV-1
:
HIV-1 infections
شناسه افزوده
:
خاناحمد، حسین، استاد راهنما
:
صالحی، رسول، استاد مشاور
شناسه افزوده
:
دانشکده پزشکی
http://elib.mui.ac.ir/site/catalogue/102029
آدرس ثابت
پیشنهاد خرید
نقد
|
پیوستها
|
موجودی
|
نظرسنجی
عنوان :
نام فایل :
نوع عام محتوا :
نوع ماده :
فرمت :
سایز :
عرض :
طول :
بررسی توانایی وکتورهای انتی ویروسی ناقص از نظر آنزیم های ...
karamzade arezoa.pdf
پایان نامه فارسی
متن
application/force-download
232 KB
85
85
نمایش
دانلود
کلیه حقوق معنوی این نرم افزار متعلق به شرکت پارس آذرخش می باشد