| نام مرکز
|
:
|
دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
|
| نوع مدرک
|
:
|
پایان نامه فارسی
|
| زبان مدرک
|
:
|
فارسی
|
| شماره رکورد
|
:
|
102077
|
| شماره مدرک
|
:
|
ت۱۴۷۶۸
|
| شماره راهنما
|
:
|
TD،۷۴۵،/ع۲ب۴،۱۳۹۳
|
| سرشناسه
|
:
|
عالی، رحیم
|
| عنوان
|
:
|
بررسی الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی و ژنهای مقاوم باکتریائی در فاضلاب های شهری و بیمارستانی [پایان‌نامه]
|
| نویسنده
|
:
|
/رحیم عالی
|
| استاد راهنما
|
:
|
؛ مهناز نیک‌آیین
|
| استاد مشاور
|
:
|
؛ حسین خان‌احمد، اکبر حسن‌زاده
|
| محل تحصیل
|
:
|
دانشکده بهداشت
|
| سال تحصیل
|
:
|
، ۱۳۹۳
|
| مقطع تحصیلی
|
:
|
رشته مهندسی بهداشت محیط، دکترای تخصصی
|
| صفحه شمار
|
:
|
ذ، ۱۲۶ ص.: مصور، جدول، نمودار
|
| يادداشت
|
:
|
این یک پایان نامه تحقیقاتی با شماره ۳۹۱۰۸۳ است
|
| يادداشت
|
:
|
چاپی
|
| چکيده
|
:
|
استفاده وسیع از آنتی بیوتیک ها در درمان انسان و حیوانات، غالبا با مقاومت باکتریایی به این ترکیبات شیمیایی مرتبط می باشد. باکتریهای مقاوم به آنتی بیوتیک منجر به ایجاد مشکلات جدی در درمان بیماریهای عفونی شده است. باکتریها و ژنهای مقاوم از طرق مختلف وارد محیط زیست می شوند. منابع فاضلابهای شهری و بیمارستانی دارای پتانسیل بالائی برای ورود باکتریها و ژنهای مقاوم به محیط زیست می باشند. انتشار این باکتریها و ژنها به داخل محیط زیست باعث افزایش دغدغه در ارتباط با سلامت عمومی شده است. مقاومت آنتی بیوتیکی در محیط زیست می تواند از باکتریهای پاتوژن به باکتریهای غیر پاتوژن منتقل شود و باعث فشار بر اکولوژی آبی از طریق تغییر در فیزیولوژی و تحرک جمعیتی شود. مطالعات نشان داده، تعداد زیادی از باکتریها و ژنهای مقاوم بویژه گونه‌های بیمارستانی در مناطقی که فاضلابهای بیمارستانی تخلیه شده‌اند یافت گردیده‌اند. ژنهای مقاوم می توانند در بیمارستان و محیط از طریق پلاسمید، اینتگرون و تراسپوزونها جابجا شوند. تعدادی از پژوهش ها گزارش نموده‌اند باکتریها و ژنهای مقاوم بیمارستانی در فاضلابهای شهری، لجن فعال و منابع آبی یافت شده‌اند. این نکته بسیار مهم است که بعضی از این منابع آبی آلوده برای آبرسانی عمومی استفاده می‌شوند. بعضی مطالعات مشخص نمودند که تخلیه فاضلابهای بیمارستانی با انتشار بالای باکتریهای مقاوم به محیط زیست مرتبط می‌باشند. در مقابل بعضی دیگر از مطالعات گزارش نموده‌اند که فاضلابهای شهری مسیر مهمی برای آزادسازی باکتریها و ژنهای مقاوم به محیط زیست می‌باشند. بهرحال برخی مطالعات نشان داده‌اند که حذف باکتریها و ژنهای مقاوم در تاسیسات تصفیه فاضلاب اتفاق نمی‌افتد و یا بندرت صورت می گیرد. حتی بعضی از گزارشات نشان داده‌اند افزایش باکتریهای مقاوم در تاسیسات تصفیه فاضلاب اتفاق می افتد. هدف مطالعه حاضر بررسی کمی و کیفی باکتریها و ژنهای مقاوم به آنتی بیوتیک در فاضلاب های خام و تعیین اثرات تصفیه خانه‌های فاضلاب شهری بر این عوامل می باشد. مجموعا ۶۶ نمونه از فاضلاب خام و پساب خروجی شش مکان متفاوت در محدوده زمانی شهریور ۹۱ ( سپتامبر۲۰۱۲ ) تا فروردین ماه ۹۲ ( آوریل۲۰۱۳ ) برداشت شد. روش HPC برای ارزیابی غلظت ARB در نمونه‌های فاضلاب استفاده شد. در این مطالعه شش آنتی بیوتیک شامل جنتامایسین، کلرامفنیکل، سفتازیدیم، تتراسیکلین و سولفومتوکسازول و اریترومایسین انتخاب شد. محیط کشت R2A آگار برای تعیین فراوانی ARB به تفکیک بر اساس راهنمای CSLI انجام شد. نمونه های فاضلاب کاملا همگن و تا ۱۰-۶ رقیق و از هر رقت بر روی محیط کشت برده شد. پلیت ها در ۳۷ درجه سانتی گراد برای حداقل ۴۸ ساعت انکوبه شدند. همه آزمایشات بصورت دوبلیکیت انجام شد و میانگین بصورت CFU/100mL گزارش شد. برای شناسائی ژنهای مقاوم به آنتی بیوتیک در هر گروهARB ، کلنی های غالب بر اساس ویژگیهای مورفولوژیکی انتخاب و مجددا بر روی محیط کشت حاوی آنتی بیوتیکی اولیه کشت داده شدند. کلنی های ایزوله شده سپس در ۱۰۰ میکرولیتر آب دیونیزه شده معلق شدند و DNA ژنومی استخراج گردید. همچنین آزمایش PCR نمونه‌های اصلی فاضلاب برای تعیین حضور/ غیاب ژنهای انتخاب شده در نمونه‌های فاضلاب خام و پساب خروجی انجام شد. استخراج و خالص‌سازی DNA از نمونه‌های اصلی با استفاده از کیت استخراج (Promega Wizard Genomic DNA purification kit, Madison, WI) انجام شد. برای هر گروه آنتی بیوتیکی، یک ژن کد کننده مقاومت انتخاب و شش جفت پرایمر برای تکثیر ژنهای انتخاب شده استفاده گردید. برای کمی سازی، سه ژن انتخاب شدReal Time PCR . برای بدست آوردن کمیت ژنهای TetW ، Sul1 و ErmB در نمونه‌های فاضلاب استفاده شد( Applied Biosystems, USA ) . آزمایش به روش SYBER GREEN انجام شد. پلاسمید حاوی هر کدام از توالی ژنها به عنوان کنترل استاندارد در Real Time PCR استفاده گردید. محصول DNA تکثیر شده حاصل از PCR متعارف بر روی ژل آگارز برده شد و استخراج DNA از ژل با استفاده از کیت استخراج (Gel purification kit, Cat NO:K-3035- ۱ Bioneer, USA) انجام شد. سپس DNA تکثیر شده به داخل وکتور PTZ 57R کلون و در انتها وکتور حامل با استفاده از کلراید کلسیم و شوک حرارتی به داخل باکتری Top 10 وارد شد. صحت فرایند بوسیله PCR و تعیین توالی ژن تکثیر شده تائید شد. غلظت پلاسمید خالص‌سازی شده بوسیله اسپکتروفتومتر تعیین گردید .( Nanodrop@ ND1000 ) برای تعیین منحنی استاندارد، پلاسمید رقیق سازی و استفاده شد. تعیین مقدار C.T برای هر غلظت بدست آمد. بررسی ممانعت کننده‌ها در همه نمونه‌های متعارف و Real Time با استفاده از 16s rRNA با پرایمرهای Eubac27F and 1492R انجام شد. غلظت ARB در نمونه‌های فاضلاب خام و پساب ورودی در محدوده ۱۰ CFU/100mL 105به توان ۵ ضرب در ۱۰ -۷/۶ به توان ۸ ضرب در ۱/۵۳ تا۱۰ به توان ۷ ضرب در ۰ -۷/۶ و برای ARGs در فاضلاب خام و پساب خروجی در محدودهCopies/100mL 1010 به دست آمد. اختلاف معنی‌داری برای HPC، ARB و ARGs در فاضلاب خام مشاهده نشد. اما این پارامترها در پساب خروجی دارای اختلاف معنی دار بودند. الگوی ARB در مقایسه با HPC در فاضلاب خام و پساب خروجی TE>CAZ>ER>STX>CHL>GM و CAZ>ER>CHL>STX>TE>GM بود. حذف موثری از ARB و ARGs در تصفیه خانه HW3 (( Log ۲ - ۷ در مقایسه با دیگر تصفیه خانه‌های فاضلاب (( Log ۰/۱ - ۳ مشاهده شد. نوسانات زیادی در ارتباط با فراوانی گروههای ARB در فاضلاب های شهری و بیمارستانی مشاهده شد. همه تصفیه خانه ها غلظت ARB را کاهش دادند بهرحال غلظت بالائی از ARB در پساب خروجی یافت شد. مشابهARB، گروههای مختلف ARGs به وفور در فاضلاب های شهری و بیمارستانی یافت شدند. میانگین شناسائی شده در شهری برای ARB و ARGs بالاتر از بیمارستانی بود. تماس انسان با باکتریها و ژنهای مقاوم بعنوان یک دغدغه سلامتی بوده و با مدیریت بیماریها ارتباط دارد. این تماس می‌تواند از راههای مختلف از جمله منابع محیطی اتفاق بیفتد. فاضلاب های بیمارستانی و شهری نقش مهمی در انتشار باکتریهای و ژنهای مقاوم دارند. نتایج این مطالعه نشان داد غلظت بالائی از باکتریها و ژنهای مقاوم در هر دو فاضلاب های شهری و بیمارستانی وجود دارند. در این مطالعه مشاهده شد غلظت باکتریها و ژنهای مقاوم در طی فرایندهای تصفیه فاضلاب کاهش می یابد اما فرایند های متعارف نمی توانند بصورت موثر این عوامل را حذف نمایند و غلظت بالائی از این باکتریها و ژنهای مقاوم وارد پساب خروجی وارد می شوند. بنابراین تخلیه پساب خروجی از تصفیه‌خانه‌های فاضلاب دارای پتانسیل بالائی برای انتشار باکتریها و ژنهای مقاوم به محیط های طبیعی دارند و می توانند برای سلامت عمومی ایجاد خطر نمایند
|
| توصیفگر
|
:
|
۱. فاضلاب- تصفیه.- کلیدواژه‌ها: پالایش آب
|
|
|
:
|
فاضلاب
|
|
|
:
|
مقاومت دارویی
|
|
|
:
|
مقاومت میکروبی دارو
|
|
|
:
|
آلاینده‌های محیطی
|
|
|
:
|
آنتی‌بیوتیک ها
|
|
|
:
|
Water Purification
|
|
|
:
|
Sewage
|
|
|
:
|
Drug Resistance
|
|
|
:
|
Drug Resistance, Microbial
|
|
|
:
|
Environmental Pollutants
|
|
|
:
|
Antibiotics
|
| شناسه افزوده
|
:
|
نیک آئین، مهناز، استاد راهنما
|
|
|
:
|
خان احمد، حسین، استاد مشاور
|
|
|
:
|
حسن‌زاده، اکبر، استاد مشاور
|
| شناسه افزوده
|
:
|
دانشکده بهداشت
|