ساخت و تایید سلول نوترکیب ‭HEK‬ و بررسی بیان MCPI انسانی در سطح RNA

منو

" ساخت و تایید سلول نوترکیب ‭HEK‬ و بررسی بیان MCPI انسانی در سطح RNA "
/ هدی محمد دزاشیبی ؛ حسین خان احمد

نام مرکز	:	دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	104238
شماره مدرک	:	‭ت۱۵۴۷۱‬
شماره راهنما	:	‭QU۴۷۵،م۳۴۴س،۱۳۹۳
سرشناسه	:	‏ محمد دزاشیبی ، هدی
عنوان	:	ساخت و تایید سلول نوترکیب ‭HEK‬ و بررسی بیان MCPI انسانی در سطح RNA [پایان‌نامه]
نویسنده	:	/ هدی محمد دزاشیبی
استاد راهنما	:	؛ حسین خان احمد
محل تحصیل	:	دانشکده پزشکی
سال تحصیل	:	، ‭۱۳۹۳‬
مقطع تحصیلی	:	بیوتکنولوژی پزشکی، کارشناسی ارشد
صفحه شمار	:	۶۵ ص: مصور، جدول، نمودار
يادداشت	:	این یک پایان نامه تحقیقاتی با شماره‭ ۳۹۳۴۳۸ ‬است
يادداشت	:	چاپی
چکيده	:	مقدمه: پروتئین کموتاکسی مونوسیت هاMCP1 یکی از فاکتورهای موثر در ایجاد بیماری های التهابی می باشد. امروزه آپتامرها به عنوان یک عامل موثر در مهار برخی بیماری ها، شناخته شده است. برای تولید DNA آپتامر بر ضد MCP1 (H-MCP1) در فرایند Cell SELEX، نیاز به سلول بیان کننده ی MCP1 در سطح سلولی می باشد.این مطالعه با هدف تولید H-MCP1 بر سطح سلول های HEK293T و تولید سلول نوترکیب EK293T/H-MCP1، طراحی شد.روش ها: در ابتدا، سازه ی ژنی شامل سکانس سیگنال زنجیره ی کاپا، H-MCP1 CDS و دومین داخل غشایی PDGFR در داخل پلاسمید pcDNA طراحی و ساخته شد. پلاسمید فوق به باکتری E. coli TOP10 ترانسفرم شد. بعد از استخراج پلاسمید از باکتری، پلاسمید فوق با آنزیم BglII خطی شده و به سلول HEK293T ترانسفکت شد و سلول ها به مدت دو هفته تحت درمان با هیگرومایسین قرارگرفتند. از سلول های مقاوم، استخراج DNA ژنومیک انجام شد. سپس با پرایمر جلوبر و معکوس اختصاصیcDNA ژن MCP1 انسانی، واکنش PCR انجام شد. علاوه بر این واکنش Real time-PCR و فلوسایتومتری برای بررسی میزان بیان MCP1 انسانی در سطح mRNA و پروتئین انجام شد. نتایج:نتایج واکنش PCR روی DNA ژنومی سلول HEK ترانسفکت شده، باند 644 bp را تایید کرد . نتایج ازمایش Real-Time نشان داد که سلول های H-mcp1 به مقدار 272 برابر در مقایسه با گروه کنترل بیان شده اتد. بر طبق نتایج فلوسایتومتری 92% از سلول های ترانسفکت شده، پروتئین MCP1 انسانی را در سطح خود بیان می کنند. از نتایج مطالعه می توان نتیجه گرفت که ژن MCP1 در ژنوم HEK293T اینگره شده و پروتئین H-MCP1 به صورت دائمی و پایدار در سطح سلول بیان می شود. بنابراین سلول ایجاد شده می تواند به طور موفقیت آمیزی در فرایند Cell SELEX جهت تولید آپتامر و همچنین سایر تحقیقات بیولوژی به کار برده شود
توصیفگر	:	نمایش ژن
	:	دی ان ا
	:	گیرنده های سطح سلول
	:	‭Gene Expression‬
	:	‭DNA
	:	‭Receptors, Cell Surface‬
	:	‭HEK293 Cells‬
	:	Monocyte Chemoattractant Proteins
	:	Genes, Synthetic
	:	Atherosclerosis
شناسه افزوده	:	خان احمد، حسین، استاد راهنما
شناسه افزوده	:	دانشکده پزشکی