ساخت و تایید سلول نوترکیب Hek- rabbit MCP- ۱ و بررسی بیان MCP-۱ خرگوشی در سطح mRNA

منو

" ساخت و تایید سلول نوترکیب Hek- rabbit MCP- ۱ و بررسی بیان MCP-۱ خرگوشی در سطح mRNA "
/ ایلناز رحیم منش ؛ حسین خان احمد

نام مرکز	:	دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	104278
شماره مدرک	:	‭ت۱۵۴۷۴‬
شماره راهنما	:	‭QU۴۷۵،ر۴۲۳س،۱۳۹۳‬
سرشناسه	:	رحیم منش‏، ایلناز
عنوان	:	ساخت و تایید سلول نوترکیب Hek- rabbit MCP- ۱ و بررسی بیان MCP-۱ خرگوشی در سطح mRNA [پایان‌نامه]
نویسنده	:	/ ایلناز رحیم منش
استاد راهنما	:	؛ حسین خان احمد
محل تحصیل	:	دانشکده پزشکی
سال تحصیل	:	، ‭۱۳۹۳‬
مقطع تحصیلی	:	زیست فناوری پزشکی، کارشناسی ارشد
صفحه شمار	:	۴۵، 19 ص: مصور، جدول، نمودار
يادداشت	:	این یک پایان نامه تحقیقاتی با شماره‭ ۳۹۳۴۱۵ ‬است
يادداشت	:	چاپی
چکيده	:	برای تولید نسل جدید داروها مانند آنتی بادی ها و آپتامرها، نیاز به تولید سلول با بیان بالای پروتئین هدف داریم. اولین قدم در تحقیقات ارزیابی موثر بودن دارو از طریق بررسی اثرات یک دارو بر مدل حیوانی بیماری مورد نیاز است. خرگوش به عنوان یک مدل حیوانی مناسب، در بسیاری از تحقیقات استفاده می شود. کموکاین MCP-1 نقش کلیدی در بیماری های التهابی نظیر آترواسکلروزیس و گرفتگی مجدد عروق ایفا می کند. بر این اساس در این تحقیق سلول ترانسفورم شده ی 293T با بیان بالای rabbit MCP-1 تهیه و تایید شد (293 T/R-MCP-1).روش ها: در ابتدا سازه ی ژنی حاویcDNA Rabbit MCP-1 سنتز و در پلاسمید pCDNA3.1 کلون شد.پلاسمید نوترکیب حاصل پس از هضم آنزیمی و خطی شدن به سلول 293T ترانسفکت شد و سلول ها به مدت یک ماه تحت درمان با هیگرومایسین قرارگرفتند. سپس به منظور بررسی بیان Rabbit MCP-1 واکنش Real time-PCR و فلوسایتومتری برای بررسی میزان بیان MCP-1 خرگوشی در سطح mRNA و پروتئین انجام شد. نتایج:انجام واکنش PCR روی ژنوم سلول 293 T انتخاب شده با پرایمر های اختصاصی،باند 737 bp مربوط بهcDNA ژن MCP-1 خرگوشی را تکثیر نمود که نشانگر ادغام سازه ی ژنی حاویcDNA Rabbit MCP-1 در ژنوم سلول 293T می باشد. واکنشRelative Real Time افزایش351.91±229.12 برابری MCP-1 خرگوشی را در سلول های ترانسفکت شده در سطح mRNA نسبت به گروه کنترل نشان داد.همچنین نتایج فلوسایتومتری بیانگربیان بالای پروتئین MCP-1 خرگوشی در سطح سلول بود.بحث:در بسیاری از تحقیقات نیاز به تولید پروتئین های هدف به میزان زیاد می باشد.در تولید پروتئین های نوترکیب حفظ تاخوردگی مناسب و تغییرات پس از ترجمه ای مناسب ضروری می باشد، به ویژه در مواردی که این تغییرات پس از ترجمه ای برای عملکرد طبیعی پروتئین ها ضروری باشد..در این تحقیق رده سلولی 293T با بیان بالای MCP-1 خرگوشی ساخته شد. از این سلول می توان در تحقیقات آینده برای تولید عوامل تشخیصی و دارویی استفاده نمود .
توصیفگر	:	نمایش ژن
	:	آر ان ا
	:	خرگوش ها
	:	گیرنده های سطح سلول
	:	‭Gene Expression‬
	:	‭RNA
	:	Rabbits
	:	‭Receptors, Cell Surface‬
	:	‭HEK293 Cells‬
	:	Monocyte Chemoattractant Proteins
	:	Genes, Synthetic
	:	Atherosclerosis
شناسه افزوده	:	خان احمد، حسین، استاد راهنما