بررسی امکان ساخت سلول نوترکیب ‭HEK‬ با بیان بالای tim۳

منو

" بررسی امکان ساخت سلول نوترکیب ‭HEK‬ با بیان بالای tim۳ "
/ منا مبلغ ناصری ؛ حسین خان احمد، مزدک گنجعلی خانی حاکمی، منصور صالحی

نام مرکز	:	دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	104317
شماره مدرک	:	‭ت۱۵۴۸۶‬
شماره راهنما	:	‭QU۴۷۵،م۲۲۴ب،۱۳۹۳
سرشناسه	:	‏‏مبلغ ناصری ‏، منا
عنوان	:	بررسی امکان ساخت سلول نوترکیب ‭HEK‬ با بیان بالای tim۳ [پایان‌نامه]
نویسنده	:	/ منا مبلغ ناصری
استاد راهنما	:	؛ حسین خان احمد، مزدک گنجعلی خانی حاکمی، منصور صالحی
محل تحصیل	:	دانشکده پزشکی
سال تحصیل	:	، ‭۱۳۹۳‬
مقطع تحصیلی	:	بیوتکنولوژی پزشکی، کارشناسی ارشد
صفحه شمار	:	۴۴ ص: مصور، جدول، نمودار
يادداشت	:	این یک پایان نامه تحقیقاتی با شماره‭ ۳۹۲۵۳۲ ‬است
يادداشت	:	چاپی
چکيده	:	مقدمه و معرفی: گلیکوپروتئینTim3 به عنوان یکی از مارکر های سطح سلولی سلول های Th1 شناخته شده و در بسیاری از بیماری ها با واسطه سیستم ایمنی تغییرات بیان این پروتئین مشاهده شده است. بعنوان مثال در بیماریهای اتوایمن و اگزما افزایش بیان این پروتئین دیده می شود. با توجه به وجود ناشناخته های بسیاردرباره ی این مولکول کمک مهاری در سیستم ایمنی، نیاز به مطالعات وسیع تردر مورد Tim3 می باشد. برای مطالعه روی پروتئین نیاز به پروتئین خالص و آنتی بادی ضد آن و بعضا سلولهای بیان کننده آن داریم. در این مطالعه در صدد بیان پروتئین Tim3 در سطح سلول 293T هستیم.روش ها: کاست بیانی Tim3از روی پلاسمید EX-W2682-M67 تهیه شده از شرکت Genecopoeia(آمریکا) با استفاده از پرایمرهای دارای جایگاه آنزیمی NheI و MluI تکثیر و در جایگاههای مربوطه در پلاسمید pHygro ساب کلون شد. پلاسمید نوترکیب محتوی ژن-Tim3 ) Tim3 pH ( پس از استخراج و خالص سازی ، با آنزیم NheI خطی شده و در سلول های 293T با استفاده از روش کلسیم فسفات ترانسفکت شد. سپس سلول های نوترکیب 293T بیان کننده Tim3 در محیط حاوی هیگرومایسین انتخاب مثبت شدند. پس از یک ماه بر روی DNA ژنومیک کلون های سلولی باقیمانده واکنش PCR به منظور بررسی ادغام cDNATim3 در ژنوم سلول 293T انجام شد.همچنین میزان بیان پروتئین Tim3 در سطح سلول به روش فلوسایتومتری ارزیابی گردید. یافته ها: نتایج هضم آنزیمی با آنزیمهای NheI و MluI بر روی پلاسمید pH-Tim3 باند 2312 و 4600 جفت بازی را نشان داد که تایید کننده صحت کلونینگ است. در واکنش PCR بر روی DNA ژنومیک باند 1100 جفت بازی تکثیر شد که نشانه ورود ژن tim3 در ژنوم سلول 293T می باشد. همچنین در فلوسایتومتری 88% سلولها از نظر بیان Tim3 مثبت بودند و شدت بیان در قسمت زیادی از سلولها بالا بود. بحث: بیان پروتئین در سیستم های بیانی پروکاریوت ها از نظر زمان و هزینه بهینه تر از سیستمهای سلولی یوکاریوتی می باشد ولی در مورد پروتئین هایی که تغییرات پس از ترجمه دارند، این سیستم بیانی جوابگو نیست. در برخی موارد ساختار فضایی طبیعی که پروتئین در موقع لنگر انداختن برسطح غشا دارد ، درتولید پروتئین های غشایی مانند Tim3 در سیستم های یوکاریوتی ،حفظ نشده و در نتیجه برای استفاده در تحقیقات تهیه آنتی بادی هایی که اپی توپهای فضایی را می شناسند و یا انتخاب آپتامر مناسب نمی باشند. بیان پروتئین Tim3 در سطح سلول می تواند ارائه دهنده پروتئین با ساختار فضایی کاملا طبیعی در پروژه های تولید آنتی بادی ، نانو بادی و آپتامر باشد
توصیفگر	:	نمایش ژن
	:	دی ان ا
	:	گیرنده های سطح سلول
	:	گلیکوپروتئین ها
	:	‭Gene Expression‬
	:	‭DNA
	:	‭Receptors, Cell Surface‬
	:	Glycoproteins
	:	‭HEK293 Cells‬
	:	Monocyte Chemoattractant Proteins
	:	Genes, Synthetic
شناسه افزوده	:	خان احمد، حسین، استاد راهنما
	:	گنجعلی خانی حاکمی، مزدک، استاد راهنما
	:	صالحی، منصور، استاد راهنما