بیان و تخلیص قطعه 34 آمینواسیدی پاراتیروئید هورمون انسانی (hPTH 1-34) از طریق فیوژن آن با توالی اینت...

منو

" بیان و تخلیص قطعه 34 آمینواسیدی پاراتیروئید هورمون انسانی (hPTH 1-34) از طریق فیوژن آن با توالی اینتئینی مربوط به ژن gyrA باکتری Mycobacterium xenopi "
سپیده ابرقویی نژاد علی جهانیان نجف آبادی

نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	105167
شماره مدرک	:	‭ت۱۵۹۷۰‬
شماره راهنما	:	‭WE۲۵۰،‮الف‬۱۴۱ب،۱۳۹۴‬
سرشناسه	:	‏ ابرقویی نژاد، ‏‏، سپیده
عنوان	:	بیان و تخلیص قطعه 34 آمینواسیدی پاراتیروئید هورمون انسانی (hPTH 1-34) از طریق فیوژن آن با توالی اینتئینی مربوط به ژن gyrA باکتری Mycobacterium xenopi
نویسنده	:	سپیده ابرقویی نژاد
استاد راهنما	:	علی جهانیان نجف آبادی
محل تحصیل	:	دانشکده داروسازی وعلوم دارویی
سال تحصیل	:	‭۱۳۹۴‬
مقطع تحصیلی	:	دکترای عمومی
رشته تحصیلی	:	داروسازی
صفحه شمار	:	۸۱ص.: جدول، نمودار، عکس.
يادداشت	:	این پایان نامه یک طرح تحقیقاتی با شماره ی ۳۹۳۶۶۵ است.
چکيده	:	مقدمه: پوکی استخوان یک بیماری رایج است که با کاهش دانسیته مینرال استخوان و تغییر ساختار بافت استخوانی شناخته می شود و در نهایت منجر به شکنندگی و آسیب پذیری استخوان می گردد. هورمون پاراتیروئید انسانی [hPTH (1-84)] هموستاز کلسیم/ فسفات را تنظیم و باز جذب استخوانی را کنترل می کند. شکل صناعی هورمون پاراتیروئید انسانی واجد اسیدهای آمینه 1 تا 34 [hPTH (1-34)]می باشد که نشان داده است اغلب اثرات بیولوژیک هورمون کامل پاراتیروئید انسانی را [hPTH (1-84)] پوشش می دهد. هدف از مطالعه حاضر بیان توالی اسیدآمینه 1 تا 34 هورمون پاراتیروئید انسانی بصورت فیوز شده به یک برچسب افینیتی و نیز یک توالی اینتئینی می باشد تا پس از بیان و خالص سازی مجموعه فوق بروش کروماتوگرافی تمایلی، جداسازی اینتئین و برچسب تمایلی از پپتید PTH (1-34) توسط اینتئین مورد استفاده القا گردد.روش ها:[hPTH (1-34)] در وکتور بیانی مناسب pTXB1 کلون گردید و پلاسمید نوترکیب حاصل به درون سلول های E. coli BL21(DE3) ترانسفورم شد و بیان پروتئین فیوژن با Isopropyl-b-D thiogalactopyranoside (IPTG) القا شد. بیان hPTH (1-34) به روشSDS-PAGE و آنالیز وسترن بلات شد. پروتئین بدست آمده بوسیله ستون کروماتوگرافی تمایلی کیتین تخلیص و با اضافه کردن دی تیوتریتول 50 میلی مولار برش پپتید مورد نظر توسط اینتئین انجام شد.یافته ها: صحت کلون شدن توالی نوکلئوتیدی PTH در پلاسمید pTXB1 توسط تعیین توالی تایید شد. غلظت 0.5 میلی مولار IPTG و دمای 30 درجه سانتی گراد به عنوان بهترین غلظت و بهترین دما برای بیان پروتئین فیوژن انتخاب شد و پپتید بدست آمده از مرحله ی تخلیص باند واضح و مشخص حدودا 4 کیلو دالتونی مربوط به پپتید PTH را روی ژل تریس-تریسین نشان داد.نتیجه گیری: در این مطالعه برای اولین بار بیان و تخلیص هورمون پاراتیروئید انسانی hPTH (1-34) ، بدون نیاز به برش آنزیمی PTH از حامل آن، بوسیله سیستم اینتئینی بدست آمد که با توجه به اینکه برای مصارف صنعتی، حذف افینیتی تگ بوسیله ی اندوپروتئازها پرهزینه ترین مرحله در تولید پروتئین نوترکیب است و میتواند با فعالیت بیولوژیکی ماده تخلیص شده تداخل کند بسیار ارزشمند است. از دیگر فواید سیستم های مبتنی بر اینتئن این است که در مرحله ی برش، پروتئین هدف با N ترمینال خودش به دست آمد ، ویژگی که، برای فعالیت پروتئین مورد نظر بسیار مهم است. این ویژگی در مقایسه با بقیه ی سیستم های بیانی که گاهی ممکن نیست و باید آمینواسیدهای اضافی به سیستم اضافه شود، بسیار قابل اهمیت است. این مطالعه مدرک مستندی در اختیار ما قرار می دهد که سیستم IMPACT می تواند به عنوان یک استراتژی تضمین کننده برای تولید پپتپدهای مختلف در E. coli درنظر گرفته شود.
توصیفگر	:	پوک ‮استخوانی‬
	:	نمایش ژن
	:	سیستم اینتئینی
	:	پروتئین فیوژن
	:	hPTH 1-34
	:	gyra
	:	Mycobacterium xenopi
شناسه افزوده	:	‏ جهانیان نجف آبادی‏‏، علی
شناسه افزوده	:	‏‏ دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی، درمانی استان اصفهان
عنوان ترجمه شده توسط فهرست نویس	:	Expression and purification of 34 amino acid fragment of human parathyroid hormone (hPTH 1-34) via its fusion to intein sequence of Mycobacterium xenopi gyrA gene