ساخت سازه ی باکولوویروسی بیان کننده ی زیر واحد A1 شیگاتوکسین تحت کنترل پروموتور آلفافیتوپروتئین به م...

منو

" ساخت سازه ی باکولوویروسی بیان کننده ی زیر واحد A1 شیگاتوکسین تحت کنترل پروموتور آلفافیتوپروتئین به منظور درمان هدفمند هپاتوسلولارکارسینوما "
شقایق حیدرپور علی جهانیان نجف آبادی، عباس جعفریان دهکردی

نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	106770
شماره مدرک	:	‭ت۱۵۹۷۳
شماره راهنما	:	‭‮ٌٌ‬WI۷۳۵،ح۹۳۹س،۱۳۹۴‬
سرشناسه	:	حیدرپور، ‏ ، ‏ شقایق
عنوان	:	ساخت سازه ی باکولوویروسی بیان کننده ی زیر واحد A1 شیگاتوکسین تحت کنترل پروموتور آلفافیتوپروتئین به منظور درمان هدفمند هپاتوسلولارکارسینوما
نویسنده	:	شقایق حیدرپور
استاد راهنما	:	علی جهانیان نجف آبادی، عباس جعفریان دهکردی
محل تحصیل	:	داروسازی و علوم دارویی
سال تحصیل	:	۱۳۹۴
مقطع تحصیلی	:	دکترای عمومی
رشته تحصیلی	:	داروسازی
صفحه شمار	:	۷۳ص.
يادداشت	:	این پایان نامه یک طرح تحقیقاتی با شماره ی ۳۹۳۳۲۲ است.
چکيده	:	مقدمه: هپاتوسلولار کارسینوما (HCC) پنجمین سرطان رایج در جهان می باشد که با مرگ و میر بالایی روبه رو است. شیمی درمانی، پرتو درمانی و پیوند کبد راه های درمانی هستند که تا کنون با موفقیت چندانی روبه رو نبوده اند. ژن درمانی بعنوان روشی جدید جهت درمان HCC بیان شده است. از آنجا که یکی از راهکارهای درمانی بیان یک ژن کد کننده سم کشنده سلولی تحت کنترل یک پروموتور اختصاصی تومور می باشد در مطالعه حاضر اقدام به بررسی امکان ژن درمانی کشنده سلول های سرطانی هپاتوسلولارکارسینوما توسط کنترل بیان ژن سم A1 شیگاتوکسین تحت کنترل پروموتور اختصاصی تومورهای هپاتوسلولارکارسینوما نمودیم. روش کار: ابتدا توالی آلفافیتوپروتئین سنتز و در پلاسمید pUltra-Bac1 کلون گردید. ژن زیرواحد A1 شیگاتوکسین نیز کلون گردید و ساخت باکمید نوترکیب نیز طبق کیت Bac-to-Bac انجام شد. ترانسفکشن سلول های Sf9با استفاده از سلفکتین II جهت وارد کردن باکمیدهای نوترکیب انجام و درنهایت تیتراسیون ویروسی صورت گرفت. توالی کد کننده A202 و A254 در پلاسمید نوترکیب pUltra-AFP با استفاده از آنزیم های برش دهنده NcoI و XhoI کلون گردید. باکتری نوترکیب DH10-Bac با استفاده از انتخاب کلونی های سفید بزرگ تشکیل شده بر روی پلیت LB آگار جداسازی گردید و به سلول های Sf9ترانسفکت گردید و اطمینان از انجام ترانسفکشن با مشاهده سلول ها و بررسی ظهور اثرات سایتوپاتیک انجام گردید.نتیجه گیری: الکتروفورز قطعات حاصل از برش آنزیمی پلاسمید نوترکیبAFP - pUltra-Bac قطعاتی با اندازه 4888 و 289 جفت باز را نشان داد که تایید کننده صحت انجام کلونینگ بود. همچنین از برش آنزیمی پلاسمید نوترکیب حاوی توالی های A202 و A254 باندهایی با اندازه 5000 جفت باز مربوط به پلاسمید نوترکیب pUltra-AFP و 600 و 700 جفت باز برای A202 و A254 به دست آمد که تایید کننده صحت کلونینگ بود و نهایتآ تعیین توالی DNA صحت کلونینگ را اثبات کرد. سپس با استفاده از دستورالعمل کیت Bac-to-Bac ، DNA ویروسی نوترکیب ساخته شد و توسط انتخاب کلونی های سفید و نیز PCR با استفاده از پرایمرهای M13 جهت ساخت DNA ویروسی تایید گردید.ترانسفکت باکمیدهای نوترکیب به سلول های Sf9 انجام شد و صحت ترانسفکشن با بررسی اثرات سایتوپاتیک مورد تایید قرار گرفت و در نهایت اثر سه غلظت 10،20 و40 آن ها بر روی سلول های HepG2 و HeLa با استفاده از تکنیک MTT مورد ارزیابی قرار گرفت. آنالیز آماری داده های حاصل از تست MTT نشان دهنده اختلاف معنی دار بین سلول های HeLa و HepG2 تیمار شده با ویروس های نوترکیب بود.بحث: همانطور که در قسمت های قبل گفته شد، ما توانستیم به طور موفقیت آمیزی یک باکمید نوترکیب با استفاده از سیستم Bac-to-Bac بیانی باکولوویروس بسازیم که بجای ساخت پروتئین نوترکیب در سلول های حشره، دارای توانایی بیان پروتئین تحت کنترل پروموتور آلفافیتوپروتئین در سلول های مبتلا به HCC می باشند. بنابراین این ویروس های DNAدار که توانایی ترانسدیوس کردن به سلول ها را داشته اما قادر به عفونت زایی نیستند، می توانند جهت انتقال و بیان انتخابی زیرواحد A1 شیگاتوکسین در سلول های توموری درخودکشی ژن درمانی استفاده گردند.
توصیفگر	:	سرطان های کبد
	:	ژن درمانی
	:	هپاتوسلولار کارسینوما
	:	آلفا فتوپروتئین ها
	:	شیگاتوکسین
	:	Bac- to- Bac
	:	HCC
شناسه افزوده	:	‏جهانیان نجف آبادی‏ ، علی
	:	جعفریان دهکردی‏ ، عباس
شناسه افزوده	:	‏‏ دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی، درمانی استان اصفهان
عنوان ترجمه شده توسط فهرست نویس	:	Production of recombinant baculovirus vector expressing shigatoxin A1 subunit under control of the alpha-fetoprotein promoter for gene therapy of hepatocellular carcinoma