انتخاب آپتامر ssDNAضد آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت B به روش Cell-SELEX و بررسی affinity آن

منو

" انتخاب آپتامر ssDNAضد آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت B به روش Cell-SELEX و بررسی affinity آن "
/ مینا میریان ؛ حسین خان احمد ؛ منصور صالحی، حجت صادقی علی آبادی، علی جهانیان نجف آبادی

نام مرکز	:	دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	110098
شماره مدرک	:	‭ت۱۸۲۰۲‬
شماره راهنما	:	‭QW۱۷۰،م۹۶۷‮الف‬،۱۳۹۵‬
سرشناسه	:	میریان، مینا
عنوان	:	انتخاب آپتامر ssDNAضد آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت B به روش Cell-SELEX و بررسی affinity آن [پایان‌نامه]
نویسنده	:	/ مینا میریان
استاد راهنما	:	؛ حسین خان احمد
استاد مشاور	:	؛ منصور صالحی، حجت صادقی علی آبادی، علی جهانیان نجف آبادی
محل تحصیل	:	دانشکده پزشکی
سال تحصیل	:	: ۱۳۹۵
مقطع تحصیلی	:	دکترای تخصصی
رشته تحصیلی	:	پزشکی مولکولی
صفحه شمار	:	ی، ۱۲۰ ص.: مصور، جدول، نمودار
يادداشت	:	این پایان نامه یک طرح تحقیقاتی با شماره ۳۹۴۱۶۹ است.
يادداشت	:	کتابنامه انگلیسی
چکيده	:	مقدمه: علی رغم تلاشهای گسترده، هنوز هم هپاتیت ب درمقایسه با بیماریهای واگیردار به عنوان یک چالش سلامت عمومی به حساب می آید. در سالهای اخیر، گام های بلندی در جهت گسترش ابزارهای موثر بر علیه هپاتیت های ویروسی برداشته شده است. از بین همه این تلاشها یک استراتژی ارزشمند، معرفی آپتامرها بوده است. آپتامرها، به عنوان رقیب قدرتمند آنتی بادی ها می توانند برعلیه هر نوع مولکول پروتئینی درسلول آلوده و نیز آنتی ژن های ویروسی نظیر پروتئین سطحی ویروس هپاتیت ب (HBsAg) انتخاب شوند. با توجه به اهمیت بالینی و ارزش اقتصادی پروتئین HBsAg و نیز منافع تحقیقاتی که در تخلیص فرم نوترکیب این پروتئین وجود دارد، برآن شدیم تا در این مطالعه از HBsAg به عنوان مدلی برای انتخاب آپتامر استفاده کنیم. روش ها: آپتامرهای ضد HBsAg با استفاده از رده سلولی HEK-293T با بیان بالای HBsAg به عنوان سلول هدف و رده فاقد HBsAg به عنوان سلول کنترل، طی فرآیند اصلاح شده Cell-SELEX (Systemic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment) جدا سازی گردید. شش مرحله SELEX و Counter SELEX انجام گرفت. در این مطالعه یک روش نوین Cell-SELEX ، بر پایه هضم توسط آنزیم deoxyribonuclease I برا ی انتخاب آپتامر علیه HBsAg به انجام رسید. ارزیابی میزان چسبندگی آپتامرهای منتخب به پروتئین هدف، بر اساس آنالیز فلوسایتومتری به انجام رسید. سپس، آپتامرهای مطلوب کلون و تعیین توالی شد و ساختار دو بعدی آنها پیش بینی گردید. یافته ها: نتایج به دست آمده از 6 مرحله گزینش، منجر به جداسازی 15 کلون متفاوت گردید که بر اساس موتیف های ساختاری خود، در چهار خانواده متفاوت دسته بندی شدند. ارزیابی پیشرفت SELEX نشان دهنده افزایش تمایل آپتامرهای منتخب با پیشرفت سیکل ها بود.نتیجه گیری: به طورکلی، یافته های این مطالعه منجر به جداسازی DNA آپتامرهایی با تمایل مطلوب علیه HBsAg گردیدکه می توانند به عنوان جایگزین مناسبی برای آنتی بادی ها در ستون های تخلیص واکسن و کیت های تشخیصی به کار روند. علاوه براین، روش اصلاح شده Cell-SELEX؛ به عنوان یک راهکار نوین به کوتاهترکردن روند انتخاب، بالا بردن میزان موفقیت و نیز انتخاب آپتامرهایی با گرایش بالا به مولکول هدف کمک نموده، در حالیکه مزایای روش Cell-SELEX در آن حفظ شده است.
توصیفگر	:	ویروس هپاتیت نوع بی
	:	دی ان ا
	:	Hepatitis B Virus
	:	DNA
	:	Aptamers, Nucleotide
	:	SELEX Aptamer Technique
شناسه افزوده	:	خان احمد، حسین، استاد راهنما
	:	صالحی، منصور، استاد مشاور
	:	صادقی علی آبادی، حجت، استاد مشاور
	:	‏ جهانیان نجف آبادی ، علی، استاد مشاور
عنوان ترجمه شده توسط فهرست نویس	:	Single strand DNA aptamer selection against hepatitis B virus surface Ag by cell-SELEX method and evaluation of its affinity