تخلیص آنزیم لیپواکسیژناز پوستی Ambystoma mexicanum و بررسی اثر آنزیم برکشت سلولی فیبروبلاست های انس...

منو

" تخلیص آنزیم لیپواکسیژناز پوستی Ambystoma mexicanum و بررسی اثر آنزیم برکشت سلولی فیبروبلاست های انسانی HFFF-PI6 "
مریم مشکولی محمد رضا مفيد، محمود آقایی

نام مرکز	:	دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	110967
شماره مدرک	:	‭ت۱۷۸۲۸
شماره راهنما	:	‭QU۱۳۵،م۵۸۲ت،۱۳۹۵‬
سرشناسه	:	‏ مشکولی، ‏ ، مریم
عنوان	:	تخلیص آنزیم لیپواکسیژناز پوستی Ambystoma mexicanum و بررسی اثر آنزیم برکشت سلولی فیبروبلاست های انسانی HFFF-PI6
نویسنده	:	مریم مشکولی
استاد راهنما	:	محمد رضا مفيد، محمود آقایی
محل تحصیل	:	داروسازی و علوم دارویی
سال تحصیل	:	۱۳۹۵
مقطع تحصیلی	:	کارشناسی ارشد
رشته تحصیلی	:	بیوشیمی بالینی
يادداشت	:	این پایان نامه یک طرح تحقیقاتی با شماره ۳۹۴۷۷۹ است.
چکيده	:	مقدمهآنزیم های لیپواکسیژناز خانواده ی متنوعی از آنزیم های پراکسید کننده ی لیپیدها هستند که دی اکسیژناسیون اسید های چرب غیر اشباع به مشتقات هیدروپروکسی مربوطه را کاتالیز می کنند. ایزو فرم های گوناگون آنزیم لیپواکسیژناز در فرآیند های زیستی مانند ترمیم زخم، التهاب، مهاجرت سلولی و تشکیل لخته ی خون نقش دارند. آکسولوتل یا سمندر مکزیکی (Ambystoma mexicanum) یک مثال بارز از ظرفیت بازسازی به دلیل توانایی این دوزیست در بازسازی اندام هاست. در مطالعه ای نشان داده شده است که سرعت مهاجرت سلول های کراتینوسیت و استئوسارکومای انسانی که بیان کننده ی ژن آنزیم لیپواکسیژناز پوستی این دوزیست هستند، افزایش می یابد که در ترمیم زخم موثر است. هدف این مطالعه بیان این آنزیم در سیستم بیانی باکتری E .coli، تخلیص آنزیم، تعیین ویژگی های کینتیکی آن و در نهایت بررسی اثر آنزیم بر کشت سلولی فیبروبلاست های انسانی می باشد.روش هاآنزیم لیپواکسیژناز پوستی دوزیست (LOXe) توسط باکتری E .coli دارای ناقل بیانی ژن آنزیم در محیط کشت TB (Teriffic Broth) بیان شد. استخراج پروتئین (LOXe) و محلول سازی آن توسط دترجنت ها و حلال های یونی متفاوت بررسی شد. پس از محلول سازی پروتئین، تخلیص آن به روش ژل فیلتراسیون کروماتوگرافی بر روی ستون Sephadex 75 انجام شد. بررسی فعالیت آنزیم و تعیین پارامترهای کینتیکی آن با سوبسترای آراشیدونیک اسید به روش اسپکتروفتومتری صورت گرفت. تاثیر آنزیم خالص شده در غلظت های مختلف بر سلول های فیبروبلاست انسانی (HFFF-PI6) به روش MTT بررسی شد.نتایج بیان آنزیم توسط باکتری E .coli در دمای ºC 25 در حضور آهن و در محیط کشت TB با موفقیت انجام شد. استخراج پروتئین توسط محلول NaCl250 میلی مولار به درستی صورت گرفت. میزان دستیابی به پروتئین خالص 77% بوده و پروتئین 5/2 برابر نسبت به حالت محلول تخلیص شده است. مقادیر pH و دمای مطلوب آنزیم به ترتیب 7 و ºC 15 به دست آمد. مقادیر Km وVmax آنزیم به ترتیب µM4/90 و µM/min63/2 محاسبه گردید. اثر آنزیم بر کشت سلول های فیبروبلاست انسانی به روش MTT نشان داد آنزیم در غلظت 3/0 نانومولار بیشترین اثر را بر میزان زنده ماندن سلول ها داشته است (P< 0.05).بحث و نتیجه گیریروش به کار رفته در استخراج و محلول سازی پروتئین (LOXe) بر این که این آنزیم به صورت یک پروتئین غشایی محیطی در E .coli بیان می شود، دلالت دارد. با توجه به نتایج تست MTT به عنوان یک تست اولیه در بررسی تاثیر این آنزیم بر سلول های فیبروبلاست، می توان اثر آنزیم بر رشد این سلول ها و همچنین ترمیم زخم را به عنوان یک عامل مثبت بر بهبود زخم مورد توجه و بررسی های بیشتر قرار داد.
توصیفگر	:	آنزیم ها
	:	آنزیم لیپواکسیژناز پوستی
	:	کشت سلولی
	:	فیبروبلاست های انسانی
	:	Hfff- P۱۶
شناسه افزوده	:	‏ مفید‏ ، محمدرضا
	:	‏ آقایی‏، محمود
شناسه افزوده	:	‏ دانشگاه علوم پزشكي وخدمات بهداشتی، درمانی استان اصفهان
عنوان ترجمه شده توسط فهرست نویس	:	Purification of epidermal lipoxygenase from Ambystoma mexicanum and investigation of enzyme's effects on fibroblasts cell culture