بهینه سازی محلول سازی انکلوژن بادی رتپلاز درEscherichia coli

منو

" بهینه سازی محلول سازی انکلوژن بادی رتپلاز درEscherichia coli "
ایمان اسماعیلی حمید میرمحمدصادقی، وجیهه اکبری

نام مرکز	:	دانشگاه علوم پزشکی اصفهان
نوع مدرک	:	پایان نامه فارسی
زبان مدرک	:	فارسی
شماره رکورد	:	114221
شماره مدرک	:	‭ت۱۷۸۹۳‬
سرشناسه	:	‏‏اسماعیلی، ‏، ایمان
عنوان	:	بهینه سازی محلول سازی انکلوژن بادی رتپلاز درEscherichia coli
نویسنده	:	ایمان اسماعیلی
استاد راهنما	:	حمید میرمحمدصادقی، وجیهه اکبری
محل تحصیل	:	دانشکده داروسازی
سال تحصیل	:	۱۳۹۶
مقطع تحصیلی	:	دکتری عمومی
رشته تحصیلی	:	داروسازی
صفحه شمار	:	۵۹ص.
يادداشت	:	طرح تحقیقاتی شماره: 395493
يادداشت	:	الکترونیکی
چکيده	:	مقدمه: رتپلاز یک پروتئین غیر گلیکوزیله و فرم نوترکیب فعال کننده‌ی پلاسمینوژن بافتی(t-pa) است که در اشرشیا کلی (E-coli) بیان می‌شود. اما بیان با مقدار بالای این پروتئین منجر به ایجاد توده‌های پروتئینی غیر فعال یا همان اینکلوژن بادی‌ها (IB) می‌شود. در مطالعه‌ی حاضر ما روش بهینه‌ای برای جداسازی، محلول سازی و ریفولدینگ IB‌های رتپلاز برای به دست آوردن پروتئین‌های فعال را گزارش کردیمروش اجرا: بعد از بیان با مقدار بالای پروتئین در E-coli BL21(DE3) ،IBها با تخریب سلولی و بعد شست وشوی مداوم با بافر حاوی تریتون X-100 جدا شدند. برای محلول سازی IB‌ها ،عوامل دناتوره کننده مختلف در pH، و غلظت‌های متفاوت استفاده شدند. روش رقیق سازی سریع برای ریفولدینگ پروتئین‌های حل شده مورد استفاده قرار گرفت. مواد شیمیایی مختلف از جمله نمک‌ها، دترجنت‌ها، قندها، الکل‌ها، پلی مرها، نمک‌های کائوتروپ و کسموتروپ، عوامل کاهنده(reducing agents) و بافره کننده در بافرهای ریفولدینگ مورد استفاده قرار گرفتند. بررسی فعالیت بیولوژیک رتپلاز ریفولد شده با روش کروموژنیک غیرمستقیم انجام شد.یافته ها: نتایج مطالعه حاضر نشان داد که بهترین عامل محلول کننده برای حل کردن IB‌های رتپلاز اوره 6 مولار با pH 12 بود. بهترین بافر برای ریفولد کردن پروتئین یک بافر حاوی گلوکز 15/1 مولار، ایمیدازول 15/9 مولار و سوربیتول 16/0 مولار بود که منجر به تولید مقدار بالای پروتئین فعال شد.نتیجه گیری: نتایج تحقیقات ما نشان داد که نوع، غلظت و pHحلال و هم چنین نوع، غلظت و pHمواد شیمیایی افزودنی می‌تواند به مقدار زیادی روی نتیجه‌ی حل کردن و ریفولد کردن IB‌های پروتئین رتپلاز اثرگذار باشد.
توصیفگر	:	رتپلاز
	:	اینکلوژن بادی
	:	افزودنی‌های ریفولدینگ
	:	چپرون‌های شیمیایی
	:	Reteplase
	:	inclusion bodies
	:	refolding additive
	:	chemical chaperone
شناسه افزوده	:	‏‏‏میرمحمدصادقی‏ ، حمید
	:	‏ اکبری‏، وجیهه
عنوان ترجمه شده توسط فهرست نویس	:	Optimizing the solubilization of reteplase inclusion bodies in escherchia coli